Fermentált búzacsíra-kivonat
(Avemar) antivirális hatásának
vizsgálata macska AIDS modellben
SUMMARY
Background: To study the disease following human immunodeficiency virus
(HIV) infection, the feline AIDS model is suitable. Human and feline immunodeficiency viruses (FIV) show a high degree of similarity; cats harbour numerous
AIDS promoting homologous viruses, such as feline adenovirus (FeAdV). Antiviral
therapy can be supplemented with fermented wheat germ extract anticancer
medical food (Avemar granules), utilizing its antitumor and immunostimulant
effects.
Objectives: To model acute and chronic immunodeficiency virus infection in
human and feline cell lines. To characterize the effect of Avemar on feline immunodeficiency virus strains, and feline adenovirus.
SUMMARY
Background: To study the disease following human immunodeficiency virus
(HIV) infection, the feline AIDS model is suitable. Human and feline immunodeficiency viruses (FIV) show a high degree of similarity; cats harbour numerous
AIDS promoting homologous viruses, such as feline adenovirus (FeAdV). Antiviral
therapy can be supplemented with fermented wheat germ extract anticancer
medical food (Avemar granules), utilizing its antitumor and immunostimulant
effects.
Objectives: To model acute and chronic immunodeficiency virus infection in
human and feline cell lines. To characterize the effect of Avemar on feline immunodeficiency virus strains, and feline adenovirus.
SEJTVONALAK
Három macskaeredetű sejtvonal segítségével végeztük a kísérleteinket. Az MBM
egy IL-2-dependens T-sejt vonal (23), az FL-4 pedig IL-2 independens macska
T-lymphocyta sejtvonal, amely cytopathiás hatás (CP) nélkül folyamatosan termeli
a FIV Petaluma (FIV-Pet) törzsét (28). A CrFK macska-vesehámsejtvonal (ATCC®
CCL-94™). Ezeken kívül emberi méhnyakrák eredetű (HeLa) sejtvonalat (ATCC®
CCL-2™) használtunk. Az MBM- és a CrFK-sejtek a heveny, az FL-4-sejtek az idült
FIV-fertőzés modellezésére alkalmasak, a HeLa- és CrFK-sejtek pedig FeAdVfertőzésére és mennyiségi meghatározására, a CrFK-sejtek a FIV mennyiségi
meghatározására (titrálásra).
SEJTKULTÚRÁK
A szuszpenziós MBM- és FL-4-sejteket 10% hőinaktivált borjúsavót (FBS),
1% penicillin-streptomycint, 1% L-glutamint és 25 mM Hepes puffert tartalmazó RPMI-1640 tápfolyadékban tenyészettük. A monolayer (egyrétegű) CrFKés HeLa-sejteket 10% hőinaktivált FBS-t, 4,5 g/L glükózt és L-glutamint, 1%
penicillin-streptomycint tartalmazó DMEM tápfolyadékban szaporítottuk
(BioWhittaker® Verviers, Belgium; Lonza ™ Walkersville, USA) 25 cm2-es sejttenyésztő edényben.
VÍRUSOK
Az európai eredetű FIV-Pisa/M2 (22) és az amerikai eredetű FIV-Petaluma (28)
törzset, valamint a FeAdV magyarországi izolátumát (25) vizsgáltuk. A FIV-izolátumokat MBM-, CrFK- és FL-4-, a FeAdV-izolátumot pedig CrFK- és HeLa-sejteken
termeltük és titráltuk. Mind a szuszpenziós, mind a 90% konfluenciát mutató
monolayer sejteket fertőztük 1 fertőző egység vírusmennyiségű (multiplicity of
infection, MOI) FIV-, ill. FeAdV-vírussal. A jellegzetes CPH kialakulásakor a sejteket
centrifugáltuk (1000 g, 5 perc), majd a felülúszót és a vírust tartalmazó sejteket
külön-külön –80 °C-on tároltuk.
FERMENTÁLT BÚZACSÍRA-KIVONATBÓL ELŐÁLLÍTOTT KÉSZÍTMÉNY (AVEMAR)
Az Avemar granulátum összetétele a következő (29): fermentált búzacsíra kivonat, maltodextrin, fruktóz, természetes narancsaroma, csomósodást gátló anyag
(kolloid SiO2), nátrium klorid.
Az Avemar granulátum készítményt fiziológiás sóoldatban vettük fel, majd
a fertőzetlen sejtekre kiterjedő esetleges toxikus hatását EZ4U sejt proliferációs és cytotoxikus fotometriás assay (Biomedica Medizinprodukte GmbH, Bécs)
segítségével vizsgáltuk. A különböző sejteket 4 × 104/lyuk koncentrációban 96
lyukú lemezeken tenyésztettük, majd 0 µg/ml, 250 µg/ml, 500 µg/ml, 1000 µg/
ml, 2000 µg/ml, 3000 µg/ml és 4000 µg/ml koncentrációjú Avemar-hígításokkal
kezeltük a sejteket, hogy a sejttenyésztő edény lyukaiban a végtérfogat 150 µl
legyen. Minden esetben három párhuzamos vizsgálatot végeztünk. Az egyszeri
Avemar-kezelés hatását 7 napon keresztül monitoroztuk, az 1., 2., 3. és 7. napon
mintát vettünk a sejtkultúrákból, és fotometriás assay segítségével vizsgáltuk a
sejtproliferációt a vizsgált Avemar-koncentrációk függvényében. A sejtek életképességét tripánkék festékkel ellenőriztük. Az Avemar antivirális tulajdonságainak
tanulmányozása érdekében a toxicitási eredményeket figyelembe véve hígítási
sorozatot készítettünk (10, 50, 100, 250, 500, 750, 1000 µg/ml), ezután kezeltük a
különböző fertőzött vagy fertőzetlen sejteket.
Az MBM-sejteket előkezeltük a különböző Avemar koncentrációkkal, majd
4 óra elteltével fertőztük a két különböző FIV-törzzsel. A fertőzést követő 11.
napon a felülúszókból mintát vettünk, de a vírushatást 17 napon keresztül monitoroztuk. FIV-Petaluma törzzsel CrFK-sejteket is fertőztünk; 4 órával
előbb, azonos időpontban, ill.
section_15
